蛋白条-生物学霸
“我在实验室里走的最远的路是WB的弯路……”
从最初的组织研磨到样品制备和蛋白质定量。。。几乎所有的坑都可以踩上去。
在熟悉了这个过程之后，我们在进一步的实验中仍然面临许多问题：例如，最近，我们不得不研究多个蛋白质在同一膜上的表达，我对我们使用的实验方法感到困惑。
第一个想法是剪掉电影，但师兄提醒：现在越来越多的杂志要求提供未剪掉的污点图片。
剥皮和重新剥皮？师兄说：这种方法可能剥皮过多或不足，导致精度和重复性低。
那怎么办？师兄让我尝试一下多色荧光WesternBlot。
但我知道多色荧光WesternBlot实验有局限呀，受制于仪器、荧光抗体，通常只能同时检测2～3个蛋白条带，根本不够用……
五荧光通道检测结果：
五个单独通道结果：
使用的一抗及稀释比例为：
Rabbitanti-USP210μL（1:2,000）
Mouseanti-AKR1C24μL（1:5,000）
BiotinylatedGoatanti-TP14μL（1:5,000）
Chickenanti-SOD120μL（1:1,000）
hFABRhodamineAnti-Tubulin20μL（1:1,000）
使用的荧光二抗/streptavidin及稀释比例为：
StarBrightBlue700GoatAnti-Rabbit8μL（1:2,500）
StarBrightBlue520GoatAnti-Mouse8μL（1:2,500）
DyLight800streptavidin2μL（1:10,000）
AlexaFluor647GoatAnti-Chicken2μL（1:10,000）
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