蛋白条：研究犬的痛苦：当你本可以发表顶级报告时，为什么你最终投资了《水杂志》？

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阅读文献，找到一个好的话题

我经常认为，想出一个好的研究课题比做实验更难。在我当医生的第一年，我希望通过查阅文献，能够独立地提出一个创新和可行的研究课题。从那一刻起，我真正理解了科学研究的真正核心，那就是创新思维的重要性。正如一句老话所说，如果有一天你脑海中突然冒出一种感觉，你可以发送CNS，甚至获得诺贝尔奖的想法，请不要怀疑。这意味着你没有读足够的文学作品。

无数次想出实验课题，然后查阅相关文献又再次否定自己。其实这一过程也是锻炼自己的最佳时机，能够自己纠正自己何尝不是一次进步呢？

确定实验方案

在正式开始实验前，最好一开始就把实验方案确定好，我的习惯是按照最后写文章的要求来。需要纯化哪些蛋白？做哪些动物实验？数据该如何分析？等等这些其实一开始就应该计划好，以免在实验过程中出现什么问题。

在这里，也给大家分享一个自己曾经的教训。当时，一个课题因为时间的关系，需要赶紧做，越早做完越能发个好文章。于是在一开始我们就火急火燎地确定好了要做哪些动物实验，一口气买了100多只小鼠，前后花了两个月时间，拿到了第一批的数据。可是做完实验后才发现，我们的实验设计并不完整，其中一些数据涉及到各种原因也并不能直接放在文章里。没办法，经过商议就只能重新完善实验方案，重新买小鼠做实验。这样一折腾就又两个月时间过去了。

最后，该项课题也大大落后于预计的时间完成，原本一篇信心满满以为可以投CNS的文章，因为最后完成的时间晚了就只能投一篇比较水的子刊。

所以，在这里想告诉大家的是，只有一开始就明确自己要做什么后，才能如期顺利的做完实验。而如果实验做到一半中途更改，发现实验数据不完整不具有逻辑性，那又只能重新设计实验。浪费试剂不说，耽误的时间将是无论如何也补不回来的！

漫长的实验过程

我上一个实验，从2020年7月确定选题，到2021年8月拿到最后一批数据，做了整整一年的时间。这一年来，我最大的体会还是应了那一句老话：工欲善其事，必先利其器。在实验的过程中，选则可靠的试剂耗材将会使你事半功倍。

以核酸提取实验为例，核酸提取是各种分子生物学实验中所必需的一个技术，然而核酸的提取通常需要繁琐的步骤。在日常的实验过程中，影响核酸提取的因素其实有很多。其中，得率低可能因素就有：1、样品裂解或匀浆处理不彻底；2、RNA沉淀没有完全溶解,吸取水相时混有有机相；3、RNA沉淀未完全溶解等等。

RNA降解原因也包括：1、组织取出后没有马上冷冻；2、细胞在胰蛋白酶里处理时间太长；3、试剂和所用器械，离心管没有经过DEPC处理，造成RNA降解。

要记住，RNA不像DNA那样坚不可破。RNA其实很脆弱，一言不合就降解。因此，后来实验室购买了一台KingFisherApex自动磁珠纯化仪，通过自动提取核酸不仅节省了工作时间和强度，也能保证提取的RNA得率高，减少RNA污染。

再比如常规WB操作中，从制胶到显色完至少需要一天的时间，其中制胶、跑电泳就要半天，还很麻烦。然而我是一个懒人，我认为花大量时间用在制胶跑胶这些步骤实在是对时间的一种浪费。因此，我成了实验室第一个购买使用NuPAGEBis-Tris预制胶的人。这款预制胶可以不费力气去配梯度，减少因过多操作而引起的实验失误率，且条带笔直锐利，不拖尾，尤其对分子量相差不明显的蛋白条带可实现高效分离，最快可半小时搞定电泳。

以上说了这么多，之所以要跟大家强调选择好的实验试剂耗材，是因为使用的试剂耗材可靠性其实是直接决定了你的实验成功与否。选择一款可靠的试剂可以让你的实验事半功倍，但是如果要让你的实验可重复性好，将来师弟师妹们也能继续使用你的这一套系统的话，那么一直使用同样的耗材就显得十分重要了。

以质粒构建实验为例，在我们实验室都习惯使用赛默飞公司的产品，诸如限制性内切酶、DNA聚合酶以及T4连接酶等都是清一色赛默飞产品，这样也避免了不同公司产品交叉使用所带来的不可预知的实验麻烦。如果随意更改使用的试剂，那么就极易可能导致实验结果重复不出来，数据与之前的研究数据也难对应得上。

如何查资料？

在做实验时，经常会遇到各种实验难题无法解决，尤其是对于刚进实验室的新手而言，当面临第一次做某个实验或者操作某台仪器时，往往显得无从下手。想通过查找文献获取解决方法，可是文献里对于具体的实验操作方法往往写的很含糊，更别提有什么注意要点了。

因此，在这里给大家推荐一个实验学习的干货网址——赛默飞Invitrogen能量加油站。这个平台里积累了大量教育资源文库，其中包括应用说明、手册和资料书籍、教学视频、行业热点资讯等，对大家在日常实验中遇到的各种困难都能起到有效的帮助。

以上这些，就是我个人做科研的一点经验之谈。祝各位读者在科研的道路上一路顺风。

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